Genética Forense (página 2)

Resultados

Figura 3 – Corrida en gel de
poliacrilamira (5%)

Se realizaron tres corridas electroforéticas en
geles de poliacrilamida (5%) para correr un total de 20 productos de
PCR de individuos diferentes. De estas 20 muestras, 11
presentaron las bandas correspondientes al producto de
amplificación del locus D1S80. Ademas de estas, se
realizó una corrida electroforética en gel de
azarosa, la cual no fue utilizada para analizar los resultados,
ya que con los mismos fueron similares a los obtenidos en el gel
de poliacrilamida teñido con plata.

Figura 4 – Corrida en gel de
poliacrilamira (5%)

En las Figuras 3, 4 y 5 se presentan los geles de
poliacrilamida, teñidos con sales de plata. En el gel
correspondiente a la figura 3 se utilizó un marcador de
peso molecular cuyas bandas corresponden a 1434bp, 1000bp, 900bp,
800bp, 700bp, 600bp, 500bp, 400bp, 300bp, 200bp y 100bp; mientras
que los geles de las figuras 4 y 5 se utilizó un marcador
de peso molecular con bandas correspondientes a 1444bp, 955bp,
736bp, 585bp, 476bp, 341bp, 258bp y 105bp.

Figura 5 – Corrida en gel de
poliacrilamira (5%)

A partir de las distancias corridas por los fragmentos
de DNAdc de peso conocido de los marcadores de peso molecular se
realizó un gráfico del logaritmo del tamaño
(Log(bp)) en función
del la distancia recorrida desde el well (en mm). Luego se
calculó la línea de tendencia para cada uno de los
tres geles utilizados, eliminando los valores
que se alejaban de la recta (Ver Figura 6).

Figura 6 – Relación
entre el logaritmo del peso molecular de los MW y la distancia
recorrida desde el well para cada uno de los tres geles
utilizados.

Luego se midió la distancia entre el well
y las bandas correspondientes a los amplicones para el D1S80 en
cada uno de los individuos. Luego se calculó utilizando
los datos de la
regresión de la Figura 6, para cada uno de los tres geles,
el peso molecular de las bandas y luego la cantidad de
repeticiones de 16bp que hay en cada una de las bandas. Para el
cálculo
de las repeticiones se consideró que el locus D1S80 esta
formado por una secuencia de 14bp, seguido por secuencias
repetitivas de 16bp, tal como se describe en http://alfred.med.yale.edu/alfred/recordinfo.asp?UNID=LO000333J. Asimismo se restaron el
tamaño de los primers (28 y 29bp respectivamente), ya que
estos no corresponden a parte de las secuencias
repetitivas.

En la tabla 1 se presentan los resultados obtenidos a
partir de los aplicones del locus D180S del cromosoma 1 humano.
En la misma se presentan para cada uno de los tres geles y para
cada una de las calles; la distancia recorrida por cada uno de
los amplicones, el logaritmo del peso molecular (en bp) calculado
a partir de las regresiones, el tamaño de los amplicones
(en bp) y la cantidad de repeticiones que cada uno de ellos
posee. Se puede observar que solo hay dos individuos homocigotos
para este sitio, que son aquellos que corresponden a la calle 6
del gel 1 y a la calle 8 del gel 2. Se encontró que estos
individuos poseían 33 y 19 repeticiones respectivamente.
La frecuencia de homocigosis fue entonces de 2
homogicotas/11individuos(fH=0,18). Luego se
calculó la frecuencia alélica de cada uno de los
alelos presentes en los individuos analizados. En los organismos
que presentaban solo una banda, se consideró que eran
homocigotas, como ya fue mencionado anteriormente. Con los
análisis realizados no puede descartarse
que los organismos hayan sufrido alguna deleción del locus
D1S80, ni que sean haploides para el cromosoma 1.

Tabla 1 –
Resultados obtenidos a partir de los geles de
poliacrilamida utilizados para correr los amplicones del
D1S80.

Figura 7 – Frecuencia
alélica para cada uno de los alelos presentes en la
muestra
analizada. Nota: En los dos organismos que se presentó
solo una banda, se los consideró homocigotos, y por lo
tanto se consideró que dicho alelo se encontraba
duplicado.

Discusión y
Conclusiones:

A partir de las muestras de isopado bucal de 20
individuos se obtvieron productos de la amplificiación del
locus D1S80 para solamente 11 de estos. Esta eficiencia en la
extracción del DNA y la posterior PCR es baja, y se debe
principalmente a deficiencias durante el trabajo de
laboratorio.
Asimismo se obtuvieron buenos resultados en general. La
frecuencia de homocigosis encontrada a partir de los 11
individuos fue de 0,18; mientras que la frecuencia de homocigosis
encontrada a partir de 1307 individuos de Argentina fue de 0,19
según
http://alfred.med.yale.edu/alfred/hetgraph.asp?siteuid=SI000567S&cutoff=0.25.
Por otra parte la frecuencia alélica pudo ser calculada
para cada uno de los alelos presentes en las muestras, pero
debido a la diferencia de individuos analizados, con la bibliografía ya mencionada,
en la misma se encuentras una mucho mayor cantidad de alelos (que
difieren en la cantidad de repeticiones) y las frecuencias de los
alelos hallados en este trabajo es
consecuentemente menor. Aún asi todas los alelos
encontrados en este trabajo están dentro del rango de
repeticiones encontradas en los trabajos previos.

El presente trabajo podría servir como para
describir la población argentina, en función del
locus D1S80, siempre y cuando se aumente la cantidad de
organismos analizados, ya que el numero analizado no es
representativo para la población de nuestro país.
Asimismo el objetivo de
dicho trabajo es netamente académico y no tuvo objetivos de
descripción de la población en
general.

Bibliografía

Strachan T. y Read A. (2003) Human molecular
genetics 3. Tercera Edición. ISBN:0-8153-4182-2.

Ayelen Rapoport

Cátedra de Genética
Humana

Septiembre de 2007